PROSIDING SEMINAR NASIONAt HASIL PENELITIAN YANG DIBIAYAI OLEH HIBAH KOMPETITIF PENINGKATAN PEROLEHAN HKI DARI HASIL PENELITIAN YANG DIBIAYAI OLEH HIBAH KOMPETITIF BOGOR, 1-2 AGUSTUS 2007 Dalam rangka Purnabakti Prof. lajah Koswara KERlASAMA FAKULTAS PERTANIAN IPB DITJEN PENDIDIKAN TINGGI DEPDIKNAS PUSAT PERLINDUNGAN VARIETAS TANAMAN DEPTAN DEPARTEMEN AGRONOMI DAN HORTIKULTURA FAKULTAS PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR , 2007 I PERBANYAKAN BAMBU BETUNG (Dendrocalamus asper (Schults f.) Backer ex Heyne) , . PADAKULTURINVITRO Sandra Arifm Azizl, Fred Rumawas 1, Livy W. Gunawan 1, Bambang S. ｐｵｾｏｫｬＬ＠ AswidinnoorI, Achmad Surkati Abidin 1, Maggy T. ｓｵｨ｡ｲｴｯｮｾＲ＠ Hajrial I Stal Pengajar Departemen Agronomi dan Hortikultura, Institut Pertanian Bokor 2Stq(Pengajar Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor I ABSTRAK I dan mata tunas Perbanyakan bambu betung dilakukan pada kultur in vitro dengan memakai eksplan benih I buku eabang. Benih bambu betung yang ditanam pada media MS dengan pengkayaan 4,4 D dan picloram masing-masing 1 dan 2 ppm, kemudian disubkultur ke media MS yang diperkaya dengan kinetin 1 ppm, menghasilkan kalus, sel-sel torpedo dari embrio somatik dengan pertumbuhan yang lambat. Tunas lateral sebagai eksplan pada media MS dengan peng kayaan BAP dan Kinetin masing-masihg 1 dan 0.5 ppm dan panjang merupakan media multiplikasi tunas terbaik yang menghasilkan jumlah tunas 12.1/ ･ｾｳｰｬ｡ｮ＠ tunas 2.42 em. Tunas-tunas yang berukuran lebih atau sarna dengan 2.5 em dapat ｢･ｲｾ｡＠ pada media MS tanpa pengkayaan, sedangkan yang berukuran kurang dari 2.5 dapat berakar pada media MS yang diperkaya dengan NAA 1.0-2.5 ppm. Aklimatisasi plantlet berhasil 100 % yang mempJnyai pertumbuhan lebih baik dari perbanyakan menggunakan benih. ' , PENDAHULUAN I Perbanyakan bambu secara vegetatif dengan memakai setek buluh beillin memberikan hasil yang memuaskan dengan kisaran setek jadi 0-58.8 % (Aziz dan Ghulamahdi, 1994; Aziz vegetatif yang dan Adiwinnan, 1997; Aziz, 1997; Aziz et Ghulamahdi, 1997). Cara ｰ･ｲ｢｡ｮｹｫｾ＠ perba nyakan lain adalah dengan kultur in vitro (Dransfield dan Widjaja, 1995). Di ｉｮ､ｯ･ｾｩ｡＠ kultur in vitro untuk bambu belum banyak dilakukan. Pada percobaan yang dilakukan oleh Ruhiyat (1998) pada bambu betung didapatkan bahwa diperlukan penambahan SAP 6 mg/l dan Kinetin 1 mg/l pada media Murashige dan Skoog (MS) untuk inisiasi awal eksplan buku cabang dari lapang. Sementara multiplikasi tunas belum teIjadi dengan baik. Perbanyakan in vitro menggunakan bahan tanaman yang relatif l<rbih sedikit dibandingkan jenis perbanyakan lainnya. Perbanyakan tanaman bambu dengan ｭ･ｮｾｧｨ｡ｫ＠ ailakan atau offset (Banik, 1980), cangkok (Dransfield dan Widjaja, 1995), setek buluh dan setek oabang di lapang (Me. Clure, 1966; Hasan, 1980; Farelly, 1984; Dransfield dan Widjaja, 1995) memerlukan bahan tanaman yang cukup banyak, kecuali untuk setek cabang. Apalagi penggunaanl anakan sebagai bahan perbanyakan memerlukan pembongkaran tanaman induk dan tenaga keIja yang banyak. , Perbanyakan secara in vitro dapat memakai beberapa bahan eksplan dfITi lapang. Dua jenis perbanyakan pada teknik ini dengan tahapan-tahapannya adalah (1) sterilisasi, induksi kalus dari biji yang dilanjutkan dengan organogenesis sehingga didapatkan piantiet \yang kemudian diaklimatisasi (Vongvijitra, 1988; Woods et ai., 1992; Yeh dan ChaI?-g, 1987); (2) pengeeambahan biji menjadi tunas-tunas yang dilanjutkan. dengan multiplikasi tunas, ;' pembentukan akar dan aklimatisasi (Vongvijitra, 1988; Mascarenhas et ai., 1988; Saxena, 1990; Lydia, tanpa tahun; Woods et al., 1992 dan Yeh dan Chang, 1987). Cara yang lam adalah dengan menggunakan kultur yang sudah bersih, sehingga tahapan pengerjaannya adalah multiplikasi tunas, pembentukan akar dan aklimatisasi. kalus Vongvijitra (1988) melaporkan pada bambu D. membranaceus hanya ｭ･ｾ､｡ｰｴｫｮ＠ em.briogenik. Woods et al. (1992) dan Yeh dan Chang (1987) berhasil membentrlk tanaman utuh , melewati embriogenesis. Woods et ai. (1992) memakai media MS yang ditambah dengan 3 mgll 2,4-D, 0.5 mg/I BAP, dan 2 % sukrosa pada kondisi gelap untuk D. strictus, sedJngkan Yeh dan memakai Chang (1987) mendapatkan pembentukan kalus pada Sino calamus latiflora ､ｾｮｧ｡＠ media MS ditambah 6 mg/l 2,4-D, 3 mg/I Kinetin, 250 mg/l polyvinyl pyrolidon, dan 5 % sukrosa. Embrioid yang terbentuk dipindahkan ke media MS ditambah 3 mg/l 2,'4-D dan 2 mg/l Kirletin untuk pembentukan Plantiet. I Pada proliferasi tunas, 'Vongvijitra (1988) memakai media MS yang ditambah dengan 21-10-5 M BAP dengan laju perbanyakan 20-25 tunas pada bambu bendrocalamus ditanam pada membranaceus. Lydia (tanpa tahun), melaporkan pada jenis bambu yang ｳｾ＠ media MS ditamBah 2.5 mg/l Kinetin mempunyai laju multiplikasi 6-7 kali dallam 6 minggu. Pada Dendrocalamus strictus, Masearenhas et al. (1988) memakai media MS iyang ditambah 0.2 % BAP, air kelapa 5 % dan sukrosa 2 %. Media ini dikoeok pada 120 irpm, sehingga 20 hari sekali. Pada Bambus4 tulda, Saxena membentuk tunas ganda dengan subkultur ｳ･ｴｩ｡ｾ＠ (1990) memakai media MS yang ditambah 8 x 10-6 M BAP dan 4 x 10-6 M Kinetin. Pemberian II ! Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian yang Dibiayai oleh Hibah KompetitiJ Bogor, 1-2 Agustus 2007 I 357 tambahan 2 x 10-6 M IAA yang menggantikan Kinetin, malah menurunkan laju multiplimsi dari 4.5 kali menjadi 3.5 kali. Vongvijitra (1988) menginduksikan pembentukan akar dengan memakai media MS yang ditambah 10-5 M NAA atau tanpa zat pengatur tumbuh pada Dendrocalamus brandisii. Untuk menginduksi akar, Mascarenhas et al. (1988) memakai media MS setengah cair ditambah sukrose 2 % berisi IAA, IBA, IPA atau NAA 0.5-5 ppm dengan berbagai periode gelap, kemudian dipindahkan ke 112 MS tanpa auksin. Saxena (1990) memakai media MS yang di tambah 6 x 10-6 M lAA dan 6.8 x 10-5 M Coumarin atau MS yang ditambah 10-5 M IAA dan 6 x 10-6 M Coumarin. Dilain pihak Lydia (tanpa tahun) memakai media pembentukan akar 112 MS yang ditambah 1 mgll NAA. Prutpongse dan Gavinlertvatena (1992) mendapatkan bahwa bahan eksplan yang baik untuk digunakan adalah yang berasal dari kuncup aksilar muda yang cabangnya belum berbunga. Kuncup-kuncup ini ditanam dalam bentuk potongan-potongan buku pada media MS berisi 22 JJM BA. Tunas-tunas yang muncul harus diakarkan pada media MS yang berisi 5.4 J.l.M NAA. Spesies yang sulit dapat dibantu proliferasinya dengan menanam pada media MS tanpa NAA. Tujuan Penelitian Mendapatkan komposisi media MS dan jenis pengkayaan hormon tumbuh yang dapat menghasilkan planlet pada bambu betung (Dendrocalamus asper (Schults f.) Backer ex Heyne) 1. 2. 3. 4. Metodologi Penelitian Penelitian ini terdiri dari 7 percobaan, yaitu: Pengaruh Auksin 2,4.,.D dan Picloram terhadap Perkecambahan Eksplan Biji Bambu Betung Pengaruh Kombinasi BAP dan Kinetin terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Eksplan Potongan Buku Cabang Bambu Betung Multiplikasi Tunas Bambu Betung dalam Subkultur a. Pengaruh Kombinasi IAA, BAP dan Casein terhadap Multiplikasi Tunas Bambu Be;tung b. Pengaruh Kombinasi BAP dan Kinetin terhadap Multiplikasi Tunas Bambu Betung c. Pengaruh Pemberian IBA terhadap Pembentukan Akar Eksplan Tunas Bambu BenniIg d. Pengaruh Pemberian NAA terhadap Pembentukan Akar Eksplan Tunas Bambu Betting Aklimatisasi Plantlet Bambu Betung Bahan dan Metode Percobaan Percobaan 1. Pengaruh Auksin 2,4-D dan Picloram terhadap Perkecambahan Eksplan Biji Bambu Betung Biji bambu betung yang berasal dari Thailand pada tahun 1994 dengan persentase perkecambahan 60 %, media MS dengan penambahan sukrosa 30 gil, auksin berupa 2,4-D, dan picloram. Biji dicuci dengan deterjen dan dibilas dengan air bersih, kemudian direndarri GA3 10 ppm selama 1 malam. Biji tersebut disterilisasi, kemudian ditanam pada media MS dengan (0.0, 0.5, 1.0, dan 2.0 ppm) dan picloram (0.0, 1.0, dan 2.0 ppm). penambahwl kombinasi ｾＬＴＭｄ＠ Kalus-kalus yang dihC!t<>ilkan dipindahkan ke media MS dengan kombinasi penambahan BAP 0-4.0 ppm dan Kinetin'O-l.O ppm Percobaan dilakukan mulai bulan Agustus sampai dengan November 1997 di Laboratorium Kultur Jaringan Jurusan Budidaya Pertanian IPB, dan pembuatan preparat di BIOTROP. I Percobaan 2. Pengaruh Kombiilasi BAP dan Kinetin terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Eksplan Potongan Buku Cabang Bambu Betung Bahan berupa potongan buku cabang bambu betung yang rumpun-rumpunnya disemprot bakterisida dan fungisida 2 kali seminggu selama satu bulan sebelum dijadikan bahan tanaman. Rumpun-nunpun dipangkas 2 minggu sebelum digunakan. Media MS dengan penam bahan sukrosa 20 gil, zat pengatur tumbuh BAP dan Kinetin. Percobaan dilakukan mulai bulan Agustus sampai dengan November 1997 di Laboratorium Kultur Jaringan Jurusan Budidaya Pertanian IPB, dan pembuatan preparat di BIOTROP. Potongan buku cabang bambu betung dari lapang disterilisasi, kemudian ditanam pada media MS, setelah 2 minggu' disubkultur pada media MS dengan penambahan kombinasi IBAP (0.0, 1.0,2.0,3.0, dan 4.0 ppm) dan Kinetin (0.0, 0.5, dan 1.0 ppm). I I; Maknlah Poster 358 I • c ," .. ｾＮ＠ I Bambu Percobaan 3. Pengaruh Kombinasi IAA, BAP dan Casein terhadap Multiplikasi tunas I Betung I Bahan yang digunakan adalah tunas bambu betung yang berasal dari kulttfr yang sudah bersih hasil percobaan Ruhiyat (1998) yang menggunakan eksplan buku ｣｡｢ｾｧＬ＠ kemudian diperbanyak dengan menggunakan media MS + BAP 3 ppm + Kinetin 1 ppm, media MS dengan penambahan sukrosa 30 gil, Casein, zat pengatur tumbuh IAA, dan BAP. Percobkn dilakukan mulai bulan Agustus sampai dengan Oktober 1998 di Laboratorium Kultur Jaringan Jurusan Budidaya Pertanian IPB. I Tunas yang dipisahkan dari media perbanyakan kemudian ditanam pa<¥t media MS dengan penambahan kombinasi A (MS), B ( MS + IAA 0.5 ppm), C ( MS + IAA 11.0 ppm), D ( MS + ｉｾ＠ 1.5 ppm), E ( MS + IAA 2.0 ppm), E (MS + BAP 0.5 ppm + 1M 0.5 ppm), G (MS + BAP 0.5 'ppm + IAA 1.0 ppm), H (MS + BAP 0.5 ppm + lAA 1.5 ppm)tI (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 2.0 ppm), ! (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 0.5 ppm + Casein 0.1 ppm), K (MS + ｾａｐ＠ 0.5 ppm + IAA 1.0 ppm + Casein 0.1 ppm), L (MS + BAP 0.5 ppm + lAA 1.5 ppm + CaSein 0.1 ppm), dan M (MS + BAP 0.5 ppm + lAA 2.0 ppm + Casein 0.1 ppm). I Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap dengan 7 ulJgan. Masingyaitu masing ulangan terdiri atas 14 eksplan. Peubah yang diamati, yaitu persentase ｾ｢ｵｨＬ＠ jumlah eksplan yang tumbuh dibagi 14; jumlah tunas/eksplan; dan panjang tunas. : ! Percobaan 4. Pengaruh Kombinasi BAP dan Kinetin terhadap Multiplikasi Tunas Bbbu Betung yang sudah Bahan yang digunakan adalah tunas bambu betung yang berasal dari ｫｵｬｾｲ＠ bersih hasil percobaan Ruhiyat (1998) yang diperbanyak dengan menggunakan meqia MS + BAP 3 ppm + Kinetin 1 ppm, media MS dengan penambahan sukrosa 30 gil, zat perigatur tumbuh BAP dan. Kinetin. ｐ･ｲ｣ｾ｢｡ｮ＠ dilakukan ｾｵｬ｡ｩ＠ bulan :,-gustus sampai dengan ｏｾｯ｢･ｲ＠ 1998 di i Laboratonum Kultur Janngan Jurusan Budldaya Pertaman IPB. . Tunas yang dipisahkan dari media perbanyakan kemudian ditanam pada media MS dengan penambahan kombinasiA (MS), B (BAP 1.0 ppm + Kinetin 1.0 ppm), C (BlAP 2.0 ppm + 1.0 ppm), E ( Kinetin 1.0 ppm), b (BAP 3.0 ppm + Kinetin 1.0 ppm), E (BAP 4.0 ppm + ｋｩｮ･ｴｾ＠ BAP 1.0 ppm + Kinetin 0.5 ppm), G (BAP 2.0 ppm + Kinetin 0.5 ppm), H (B4P 3.0 ppm + Kinetin 0.5 ppm) dan I (BAP 4.0 ppm + Kinetin 0.5 ppm). I Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap dengan 7 ulangan. Masing.' masing ulangan terdiri atas 14 eksplan. Peubah yang diamati, yaitu persentase ｾ｢ｵｨＬ＠ yaitu jumlah eksplan yang tumbuh dibagi 14; jumlah tunas/eksplan; dan panjang tunas. I I • I Percobaan 5. Pengaruh Pembenan IBA terhadap Pembentukan Akar Eksplan Tunas Bambu I Betung I Bahan yang digunakan adalah tunas bambu betung yang berasal dari kultur yang sudah bersih hasil percobaan Ruhiyat (1998) yang diperbanyak dengan menggunakan media MS + BAP 3 ppm + Kinetin 1 ppm, media MS dengan penambahan sukrosa 30 gil, zat penka tur tumbuh ·IBA. Percobaan dilakukan mulai bulan September sampai dengan Desemher 1998 di Laboratorium Kultur Jaringan Jurusan Budidaya Pertanian IPB. Tunas yang diblsahkan dari media perbanyakan kemudian ditanam pada media MS sebagai kontrol dan media MS dengan penambahan IBA 0.5-4.0 ppm. I Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap dengan 7 ｵｬｾｧ｡ｮＮ＠ Masingmasing ulangan terdiri atas 14 eksplan. Eksplan yang dipakai pada percobaan ini mempunyai MS dengan ukuran yang cukup besar yaitu diatas 2.5 cm. Eksplan ditanam pada ｭ･､ｩｾ＠ penambahan IBA 0-4.0 ppm. Peubah yang diamati yaitu jumlah tunas/ekspIan; panjang tunas; jum1ah cabangleksplan;jumiah akar/eksplan; dan panjang akar. 1 I \ercobaan 6. Pengaruh Pemberian NAA terhadap Pembentukan Akar Eksplan tunas Bambu Betung. . Bahan yang digunakan adalah tunas bambu betung yang berasal dari kuInk- yang sudah bersih hasil percobaan Ruhiyat (1998) yang diperbanyak dengan menggunakan media MS + BAP media ｍｾ＠ dengan penambahan sukro.sa 30 gil, zat ｰ･ｾｧ｡ｴｵｲ＠ tumbuh 3 ppm + Kinetin 1 ｾｰｭＬ＠ NAA. Percobaan dilakukan mulru bulan September sampru dengan Dese er 1998 di Laboratorium Kultur Jaringan Jurusan Budidaya Pertanian IPB. Tunas yang di isahkan dari media perbanyakan kemudian ditanam pada media MS sebagai kontrol dan medi MS dengan penambahan NAA 0.5-3.0 ppm. j Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian yang Dibiayai oleh Hibah KDmpetitiJ Bogor, 1-2 Agustus 2007 359 1 Raneangan yang digunakan adalah Raneangan Aeak Lengkap dengan 7 ｵｬｾ｡ｮＮ＠ Masing: masing ulangan terdiri atas 14 eksplan. Eksplan yang dipakai pada pereobaan lID mempunyru ＰＮＵＭＳｾ＠ ppm. ukuran 1.5-2.5 em. Eksplan ditanam pada media MS dengan penambahan ｾａ＠ tunas/eksplan, panJang tunas, Jumlah Peubah yang diamati yaitu persentase tumbuh, ｪｵｭｬｾ＠ : akar/eksplan, panjang akar, jumlah akar/eksplan, dan panJang akar. I Pereobaan 7. Aklimatisasi Plantlet Bambu Betung , Aklimatisasi'dari hasil perbanyakan in vitro dari hasil percobaan 4 dan 6 dilakuKan pada' media pasir. HASIL Percobaan 1. Pengaruh Auksin 2,4-D dan Pic10ram terhadap Perkeeambahan Eksplan Biji Bambu , Betung Pada media kontrol (MS tanpa penambahan ZPT) didapatkan biji yang berkeeambah dan menghasilkan tunas-tunas. Tunas-tunas ini kemudian ditanam pada media MS, dengan penambahan BAP dan Kinetin masing-masing 3 dan 1 ppm. Multiplikasi sangat lambat, dari 1 eksplan hanya dihasilkan rata-rata 2-4 tunas dalam 6 minggu. Kalus dihasilkan pada media MS dengan penambahan kombinasi 2,4-D dan pic10ram (Tabel 1), pada beberapa kombinasi perlakuan tersebut tidak menghasilkan kalus. Penampang irisan membujur mikroskopis kalus ini dilihat dengan mikroskop, persiapan preparat dengan memakai metode Sass (1951). Kalus-kalus ini kemudian dipindahkan ke media MS dengan kombinasi penambahan BAP 0-4 ppm dan Kinetin 0-1 ppm. Pengamatan kalus yang berasal baik dari media 2,4-D 1.0 dan 2.0 mg/l maupun pic10ram 1.0 dan 2.0 ppm yang disubkulturkan ke media MS dengan penambahan kombinasi BAP 2 ppm dan Kinetin 0.5 ppm memperlihatkan kalus-kalus dengan tonjolan-tonjolan. Hasil pengamatan mikroskopis menunjukkan tonjolan-tonjolan' adalah embrioid. Embrioid tumbuh sampai tahap torpedo, sebagian dari kalus ada yang berkembang menjadi shoot bud, tetapi shoot bud ini juga gagal tumbuh memanjang. Pada media MS, kalus yang dilihat seeara mikoskopis hanya berupa massa sel yang belum terdiferensiasi. Tabel 1. Kalus pada Media MS dengan Penambahan 2,4-D dan Pic10ram Zat pengatur tumbuh (ppm) Keadaan kalus Pic10ram 2,4-D Kompak 0.0 1.0 Kompak, berwarna putih susu 0.5 1.0 Kompak, berwarna putih susu 0.5 2.0 Kompak, berwarna putih susu 1.0 0.0 Spons putih transparan 1.0 1.0 Kompak, permukaannya dipenuhi tonjolan-tonjolan yang jelas, 1.0 2.0 berwarna putih kekuningan Remah, transparan (friable) 0.0 2.0 Remah, transparan (friable) 2.0 2.0 Pereobaan 2. Pengaruh Kombinasi BAP dan Kinetin terhadap Pertw:pbuhan dan ｐ･ｲｫｬＱ｢ｾｧ｡ｮ＠ Eksplan Potongan Buku Cabang Bambu Betung .. Eksplan ｰｯｴｾｧ｡ｮ＠ buku cabang diinisiasi pada media MS, kemudian setelah beberapa saat dlpmdahkan ke media MS dengan perkeeambahan BAP dan Kinetin. Potongan buku bambu betung yang diinisiasi selalu terkontaminasi, sehingga tidak didapatkan kultur yang bersih. Pereobaan 3. Pengaruh Kombinasi 1AA, BAP dan Casein terhadap Multiplikasi Tunas Bambu Betung , ｐ｡､ｾ＠ media ｰ･ｲ｢ｾｹ｡ｫｮ＠ persentase tumbuh tunas-tunas yang berukuran sangat keeil (kurang dan 0.5 em), keel1 (0.5-1.9 em) dan sedang sampai besar (;;:: 2 em) berturut-turut adalah Rata-rata jumlah tunas 27.55 ± 15.99. Subkultur ,dilakukan setiap 6 minggu 50, 7?, dan ＱＰｾＮ＠ subkultur terus-menerus sebanyak 8-10 kali pada media perbanyakan sekall. Setelah ､ｬｉｾ｡ｮ＠ dengan konsentrasl zat pengatur tumbuh dan gula yang Sama, terjadi penurunan jumlah tunas/eksplan. Perubahan pemberian konsentrasi zat pengatur tumbuh dan gula pada media perbanyakan, meningkatkan jumlah tunas. ' Pada setiap perlakuan pada pereobaan ini persentase tumbuh semuanya bera! di atas 50 % (Tabel 2). Pada'media dengan penam"bahan kombinasi BAP 0.5 ppm + 1AA (1. ;1.5 dan \' 360 ' \ . '. ....... ( Ma lah Poster 2.0 ppm) yaitu media G, II, I dan media dengan penambahan kombinasi BAP (0.5 ppm) + IAA (1.5 dan 2.0 ppm) + casein (0.1 ppm) yaitu media L tian ｾｍ＠ didapatkan persentase tumbuh sebesar 100%. Media MS tanpa zat pengatur tumbuh A, B, C dan J. seeara nyata mempunyai persentase tumbuh yang lebih keeil dibandingkan Q, II, I, L, dan M, sedangkan B dan Eo f dan K berada diantaranya. Terlihat adanya pertambahan persentase tumbuh dengan penambahan IAA, atau BAP + IAA atau BAP + IAA + Casein, walaupun tidak nyata. Konsentrasi IAA! 0.5 ppm atau tanpa IAA mengurangi persentase tumbuh (Tabel 2). i Tabel 2. Persentase Tumbuh Bambu Betung, pada Jumlah TunaslEksplan dan Panjang Tunas MS dengan Penambahan IAA, BAP dan Casein I Persentase Jumlah fanjang Tunas Kode Komposisi Tumbuh (%) TunaslEksplan i (em) Media 57.14 b 1.36 (1.26 c) q.32 (0.89 cd) A MS B 57.14 b 1.43 (1.28 c) q.36 (0.91 cd) MS + IAA 0.5 ppm 0.39 (0.93 cd) 71.43 ab 1.57 (1.36 c) MS + IAA 1.0 ppm C 57.14 b 1.79 (1.37 c) q.36 (0.91 cd) D MS + IAA 1.5 ppm 71.43 ab 2.21 (1.53 be) 0.43 (0.95 cd) E MS + IAA 2.0 ppm 71.43 ab 1.79 (1.42 c) 0.41 (0.94 cd) F MS + BAP 0.5 ppm + IAA 0.5 ppm G, 100.00 a 4.43 (2.14 a) 1.61 (1.41 a) MS + BAP 0.5 ppm + lAA 1.0 ppm 100:00 a 4.64 (2.21 a) 0.91 (1.18 abc) MS + BAP 0.5 ppm + lAA 1.5 ppm H 100.00 a 3.93 (2.08 ab) 1.18 (1.25 ab) I MS + BAP 0.5 ppm + IAA 2.0 ppm 57.14 b 3.29 (1.73abe) 0.55 (0.86 d) J MS + BAP 0.5 ppm + IAA 0.5 ppm + Casein 0.1 ppm K 85.71 ab 2.86 (1.73 be) 0.64 (1.04 bed) MS + BAP 0.5 ppm + IAA 1.0 ppm + Casein 0.1 ppm 4.00 (2.11 ab) 1'.21 (1.29 ab) L 100.00 a MS + BAP 0.5 ppm + lAA 1.5 ppm + Casein 0.1 ppm MS + BAP 0.5 ppm + lAA 2.0 ppm 100.00 a 4.71 (2.22 a) 0.83 (1.12 bed) M + Casein 0.1 ppm I Keterangan: Angka pada kolorn yang sarna yang diikuti oleh hurufyang sarna tidak berbeda ｮｹ｡ｾ＠ +0.5). taraf 5%. Angka dalarn kurung hasil transformasi "(X pada uji DMRT • Pada Tabel 2 dapat dilihat jumlah tunas/eksplan tertinggi (4.71 tunas/ekkplan) dieapai pada media M (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 2.0 ppm + casein 0.1 ppm) yang tidak iberbeda nyata seeara berurutan dengan media H (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 1.5 ppm) 4.64 ｾ｡ｳＯ･ｫｰｬｮＬ＠ G (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 1.0 ppm) 4.43 tunas/eksplan, L (MS + BAP 0.5 ppm -11 lAA 1.5 ppm + easein 0.1 ppm) 4.00 tunasleksplan, I (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 2.0 ppm) 3.93 :runas/eksplan, J. (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 0.5 ppm + casein 0.1 ppm) 3.29 tunas! eksplan dan K (MS + BAP 0.5 ppm + IAA 1.0 ppm + casein 0.1 ppm) 2.86 tunasleksplan. Media MS tanpa penambahan zat pengatur tumbuh (A) merupakan media yang menghasilkan tunas terendah (1.36 tunas/eksplan). Pada media MS yang hanya diberi penambahan lAA saja hasilnya tidak sebaik kalau ditambahkan lagi dengan BAP dan lAA atau BAP, IAA, dan Case in. Media MS tanpa penambahan zat pengatur tumbuh dan MS dengan penambahan lAA saja memberikan panjang tunas yang terpendek. Seeara keseluruhan tunas-tunas yang dihasilkan pada pereobaan ini sangat pendek-pendek (kurang dari 1.00 em). Media MS yang diberi penambahan BAP dan IAA hampir tidak meningkatkan panjang tunas dengan bertamba?nya konsentrasi lAA, demikian pula halnya untuk penambahan BAP dan Casein. '. I , Pereobaan 4. Pengaruh Kombinasi BAP dan Kinetin terhadap Multiplikasi Tunas Bambu Betung , Pereobaan ini menggunakan MS dengan penambahan kombinasi BAP i dan Kinetin. Eksplan yang digunakan berukuran 0.5-2.0 em. Kematian eksplan terjadi pada ･ｾｰｬ｡ｮＭｫｳ＠ yang beruk.uran 0.5-1.0 em. Kebanyakan tunas yang diamati adalah tunas baru ｹ｡ｮｾ＠ tumbuh dari eksplan awal. Semua peubah yang diamati nyata dan sangat nyata dipengaruhi oleh jenis media ｾＮ＠ i Pada Tabel 3 dapat dilihat bahwa persentase tumbuh seeara nyata terend8h didapatkan pada media MS dengan penambahan BAP dan Kinetin 2.0 dan 0.5 ppm (14.29° '), sedangkan tertinggi pada media MS + BAP 1.0 ppm + Kinetin 0.5 ppm. Kemungkinan kemati yang tinggi pada media ini disebabkan oleh ukuran eksplan yang keeil (0.5-1.0 em). Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian yang Dibiayai oleh Hibah Kompetitif Bogor, 1-2 Agustus 2007 361 Media E (MS + BAP 1 ppm + Kinetin 0.5 ppm) dengan 12.07 tunasleksplan, nyata lebih . tinggi dibandingkan dengan kontrol (A) 1.36 tunas!eksplan, media-media lain ｴｩｾ＠ berbeda dengan kontrol. Pada Kinetin 0.5 ppm, penambahan BAP dari 1 menjadi 4 ppm men)rebabkan penurunan jumlah tunasleksplan, sedangkan pada Kinetin 1.0 ppm hal yang sebaliknra terjadi (TabeI3). Tabel3. Persentase Turnbuh, Jumlah TunaslEksplan, dan Panjang Tunas Bambu Betung pada Media MS dengan Penambahan BAP dan Kinetin Persentase Jumlah Tunas! Panjang Tunas Kode Kombinasi Perlakuan Media BAP Kinetin Turnbuh (%) Eksplan (em) 1".36 (1.64 b) 0.32 (0.89 be) A 0.0 0.0 57.14 (6.03 a) B 1.0 1.0 57.14 (6.03 a) 3.12 (1.98 b) 1.23 (1.15 be) C 3.71 (2.11 ab) 0.63 (1.ot be) 2.0 1.0 57.14 (6.03 a) 8.64 (2.92 ab) 1.46 (1.33 ab) 3.0 1.0 71.43 (7.36 a) D E 4.0 1.0 57.14 (6.03 a) 10.14 (3.03 ab) 1.62 (1:34 ab) F 1.0:. 0.5 100.00 (10.03 a) 12.07 (3.41 a) 2.42 (1.65 a) ＱＴＮＲｾ＠ (2.04 b) 3.00 (1.75 b) 0.19 (Q.80 e) 2.0 0.5 G H 1.71 (1.74 b) 0.78 (1'.05 be) 3.0 0.5 57.14 (6.03 a) I 4.0 0.5 85.71 (8.69 a) 6.21 (2.66 ab) 1.23 (1,.27 be) Keterangan : Angka pada kolom yang sarna yang diikuti oleb buruf yang sarna tidak berbeda nyata pada! uji DMRT taraf 5%. Angka dalam kurung basil transformasi ..J(X+O.5). Panjang tunas pada media MS dengan penambahan BAP 1.0 ppm dan Kinetin: 0.5 ppm seperti pada jumlah tunas!eksplan merupakan komposisi media menghasilkan tunas-tupas yang nyata Iebih panjang bpa dibandingkan dengan kontrol (MS), dengan nilai berturut-turut: 2.42 dan 0.32 em (Tabel 3). , ; I Pereobaan 5. Pengaruh Pemberian rnA terhadap Pembentukan Ak.ar Eksplan Tunak Bambu Betung· HasH uji lanjut memperlihatkan bahwa tidak terdapat perbedaan jumlah ｴｵｮｾＯ･ｫｳｰｬ｡Ｌ＠ panjang tunas, jumlah eabangleksplan, jumlah akar dan panjang akar akibat pembetian rnA maupun tanpa IBA (Tabel 4). Pada media yang dieoba ini kemungkinan ukuran ･ｫｳｾｬ｡ｮ＠ yang eukup besar dapat menginduksi pembentukan akar, walaupun tanpa penambahan zat Ipengatur tumbuh IBA. Ii I i Tabel 4. Jumlah TunasIEksplan, Panjang Tunas, Jumlah CabanglEksplan, Jumlah ｾ｡ｲＬ＠ Panjang Akar Hasil Media Pembentukan Akar MS yang Diperkaya dengan rnA Peubah Jumlah TunaslEksplan Panjang Tunas (em) Jumlah Cabangleksplan Jumlah Akar/eksplan Panjang Akar (em) o 2.14 2.56 0.00 0.00 0.00. 0.5 1.43 3.83 0.57 0.00 0.00 1.0 1.29 6.71 0.29 0.14 1.93 IBA (ppm) 2.0 2.5 1.43 0.86 5.13 4.09 0.29 0.00 0.14 0.14 1.93 0.61 1.5 0.71 2.47 0.14 0.00 0.00 dan I 3.0 0.71 4.29 0.43 0.57 2.29 3.5 1.29 5.07 0.29 0.14 1.80 4.0 0.57 4.24 0.29 0.14 0.26 Tabel 5. Jumlah Tunas/EkspUm, Panjang Tunas, Jumlah Akar, Panjang Akar dan Petsen tase Turnbuh Pereobaan Pembentukan Akar Menggunakan Media MS dan NAA NAA(ppm) . 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 33.33 50.00 50.00 50.00 66.67 66.67 0.00 Persentase Tumbuh (%) 2.17 1.08 1.50 2.92 1.58 1.58 2.00 Jumlah TunasIEksplan 1.03 0.52 0.93 1.15 0.73 1.32 1.48 Panjang Tunas (em) 0.00 0.67 1.83 1.83 3.25 7.33 9.08 Jumlah Akar/eksplan (2.78 a) (1.23 b). (1.43 b) (1.73. ab) (1.74 ab) (1.99 ab) (2.75 a) Panjang Akar (em) 0.00 0.46 0.85 0.38 0.60 0.49 0.81 Keterangan: Angka pada baris yang sama yang diikuti oleb burufyang sarna tidak berbeda nyata pada uji DMRT 5 %. Angka dalarn kurung basil transformasi ..J(X+O.5). Peubah Pereobaan 6. Pengaruh Pemberian NAA terhadap Pembentukan Akar Eksplan TunaS Bambu , Betung Tanpa penambahan NAA pada media MS menyebabkan akar tidak dihasilkan sehingga persentase tumbuh (bertunas dan ｢ｾ＠ menjadi 0 %. Pemberian NAA 2.5 dan ppm to 362 Mak4lah Poster " I· ... ,. mempunyai persentase tumbuh yang lebih tinggi, yaitu masing-masing 66.67 %. NAA 1.0, 1.5, dan 2.0 ppm mempunyai persentase tumbuh 50 %.' ｾ＠ Pemberian NAA menginduksi pembentukan akar. Penambahan konsentrasi NAA meningkatkan jumlah akar yang dihasilkan, dengan nilai tertinggi pada NM 3.0 ppm sebesar 9.08 akar/eksplan. Pemberian NAA 0.5-2.0 ppm tidak berbeda nyata dengarl tanpa pemberian I NAA. \ I Pereobaan 7. Aklimatisasi Plantlet Bambu Betung Plantlet yang berukuran kurang dari 3 em akan mengalami kematian pada media pasir. Rata-rata persentase kematian 80 %. Pada plantlet yang mempunyai ukuran iyang eukup yaitu lebih atau sama dengan 3 em, persentase bibit jadi kurang lebih 100%. I II -. PEMBAHASAN I Dari dua pereobaan untuk multiplikasi tunas yang dilakukan, d1idapatkan bahwa lAA, penambahan BAP dan Kinetin kedalam media MS lebih baik dibandingkan ｾ･ｮ｡ｭ｢ｨ＠ BAl>, dan Casein. Sesuai dengan hasil penelitian Ruhiyat (1998) bahwa HAP dan Kinetin .merupakan zat pengatur tumbuh pada media MS sesuai untuk pertumbuhan bkbu betung pada kultur in vitro. Pada pereobaannya, Ruhiyat mendapatkan penambahan pacfu media MS cair berupa BAP, Kinetin dan IBA berturut-turut 3, 0.5, dan 0.2 mgll merupakan ｾｯｮｳ･ｴｲ｡ｩ＠ terbaik dengan jumlah tunas yang dihasilkan 1.5 tunas/eksplan, persentase tumbuh 34.05 % dan panjang tunas 1.65 cm. Pada percobaan ini didapatkan penambahan jumlah BAP dan . etin terbaik pada media padat untuk multiplikasi tunas yang yang lebih rendah yaitu hanya 1.0 dan 0.5 mgll dengan hasil yang lebih·baik, yaitu jumlah tunas 12.07 tunas/eksplan, persen e tumbuh 100 %, dan panjang tunas 2.42 em. I Pada pereobaan yang dilakukan oleh Prutpongse dan Gavinlertvatana (1992) untuk 55 jenis bambu, termasuk didalamnya bambu betung dan ampel, didapatkan b wa penggunaan tunas aksilar dan media MS juga dilakukan dengan penambahan 22 JlM BA untuk eksplan ｢･ｲｵｰｾ＠ 2.7-5.4 J.1M BA untuk eksplan berupa potongan buku. Pereobaan-J;'ereobaan lain yang juga menggunakan BA untuk jenis-jenis bambu yang lain misalny'::l I pada ｾＮ＠ membranaceus (Vongvijitra, 1988), D. latiflorus (Zamora, Gruezo dan Damasco, 1987) dan D. hamiltonii (Chambers, Heuch dan Pierrie, 1991). Percobaan yang juga memakai penabbahan BA dan . Kinetin adalah pada B. tulda oleh Saxena (1990). Pada perbanyakan eksplan untuk bahan pereobaan didapatkan unnMc eksplan yang berukuran kurang atau sarna dengan 0.5 em mempunyai persentase tumbuh sJkitar 50 %, pada eksplan ukuran 1-2 em dan lebih besar atau sama dengan 2 cm berturut-turut 60170 dan 90-100%. Hal ini sesuai dengan hasil percobaan multiplikasi dengan penambahan lAA, mAP, dan Casein, bila eksplan yang digunakan berada pada selang 0.5-1.0 cm lebih banyak ditemJkan kematian. Pemberian IBA zat pengatur tumbuh pada MS untuk pembentukan aIJ:ar temyata tidak sebaik penggunaan NAA. Pada percobaan yang menggunakan IBA sebagai zat Ipengatur tumbuh didapatkan bahwa bila ukuran eksplan sudah lebih atau sama dengan 5 cm, mhlca eksplan akan didapatkan berakar, walaupun tanpa IBA. Sedangkan pada percobaan yang menggunakan walaupun ukuran eksplan berkisar ± 1 em, eksplan tetap dapat berakar. Bild ukuran eksplan bila ukuran kurang dari 5 em perIu ditambahkan NAA untuk pembentukan akar, ｳ･､｡ｮｾ＠ eksplan ;?! 5 cm tidak dipedukan penambahan zat pengatur tumbuh. Penggunaain NAA dan IBA yang dilakukan oleh peneliti lain adalah pada jenis bambu D. membranaceLs dengan NAA (Vongvijitra, 1988). I Kesetimbangan antara sitokinin dan auksin dipedukan dalam bentuk lQnetin dan IAA untuk pembelahan sel secara in vitro pada tembakau dan beberapa spesies lafunya (Krikorian, IAA, BAP, dan 1995). Pada pereobaan multiplikasi tunas pada media MS dengan ｰ･ｮ｡ｭ｢ｨｾ＠ casein menghasilkan jumlah tunas tidak sebaik media MS dengan penambahan BAP dan kinetin. oleh Prutpongse dan Gavinlertvatana (1992) untuk 55 jenis Pada percobaan yang ､ｩＱ｡ｫｵｾ＠ media bambu, termasuk didalamnya bambu betung dan ampel, didapatkan bahwa ｰｾ｢ｧｵｮ｡＠ NlS juga dilakukan dengan penambahan 22 JlM BA untuk eksplan berupa tk;as aksilar dan yang juga 2.7-5.4 J.1M BA untuk eksplan berupa potongan buku. ｰ･ｲｃｏ｢｡ｮＭｾｬｩ＠ menggunakan BA untuk jenis-jenis bambu yang lain misalnya pada D. membranaceus (Vongvijitra, 1988), D. latiflorus (Zamora, Gruezo, dan Damaseo, 1988) D. hamiltonii ., (Chambers, Heuch. dan Pierrie, 1991). Percobaan yang juga memakai pe bahan BA dan I kinetin adalah pada B. tulda oleh Saxena (1990). 1 NAA . Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian yang Dibiayai aleh Hibah Kompetitif Bogar, 1-2 Agustus 2007 363 I Pada pembentukan akar penambahan NAA pada media MS menghasilkan perakaran yang lebih baik dibandingkan penambahan IBA. Pemberian IBA zat pengatur tumbuh padJ MS untuk pembentukan akar temyata tidak sebaik penggunaan NAA. Pada percobaan [yang menggunakan IBA sebagai zat pengatur tumbuh didapatkan bahwa bila ukuran eksplan shdah lebih atau sama dengan 5 cm, maka' ｾｫｰＬｬ｡ｮ＠ akan berakar, walaupun tanpa IBA. Sedangkan ｾ｡､＠ percobaan yang ｭ･ｮｧｴ｡ｫｾ＠ NAA didapatkan ｷ｡ｬｵｰｾ＠ ukuraneksplan berkisar ± 11 cm, dan 5 cm perlu dltambapkan NAA lftuk eksplan tetap dapat berakar. Blla ukuraJi eksplan ｫｵｲｾｧ＠ pembentukan akar, sedangkan bila ukuran eksplan';:::: 5 em tidak diperlukan: penambahan zat pengatur tumbuh. Penggunaan NAA yang dilakukan oleh peneliti lain adalab pada jenis bambu D. membranaceus dengan NAA (Vongvijitra, 1988). ' I KESIMPULAN Penanaman benih betwlg pada media MS dengan penambahan 2,4;.D 1 ppm dan ｰｩ｣ｬｾｲ｡ｭ＠ 2 ppm, kemudian dipindahkari ke media MS dengan penambahan kombinasi BAP 2 ppm dan Kinetin 0.5 ppm, menghasilkan embrioid yang berbentuk torpedo. ... I ｾ＠ Tunas-tunas hasil mtiltiplikasi dari benih betung pertumbuhannya sangat lambat. Multiplikasi tunas betung terbaik pada percobaan menggunakan media MS dengan penambhlIan BAP dan Kinetin adalah pada kombinasi BAP 1.0 ppm dan Kinetin 0.5 ppm. Didapatkan persentase tumbuh 100 %, jumlah tunas/eksplan 12.07, dan panjang tunas 2.42 cm. PenambhlIan IAA, BAP, dan Casein tidak sebaik penambahan BAP dan Kinetin. I Persentase bertunas dan berakar terbaik dengan eksplan berukuran kecil (0.5-2.0' cm) didapatkan pada penambahan NAA 2.5-3.00 ppm. Media MS dengan penambahan NAA 2.5 rpm mempunyai jumlah tunas/eksplan 1.58, panjang tunas 1.32 em, jumlah akar 7.33, panjangakar 0.60 cm, dan persentase bertunas dan berakar 66.67%. Eksplan yang berukuran ;:::: 5 cm tidak memerlukan penambahan zat pengatur tumbuh untuk pembentukan akar. Media MS ､･ｾｧ｡ｮ＠ penambahan NAA lebih baik untuk pembentukan akar dibandingkan penambahan IBA. 1 UCAPAN TERIMA KASIH Ueapan terima kasih Penulis sampaikan kepada Komisi Pembimbing Bapak Fred Rumawas, Ibu Livy W. Gunawan (Alm.), Bapak Bambang S. Purwoko, Bapak ｈｾｲｩ｡ｬ＠ Aswidinnoor, Bapak Achmad Surkati Abidin, dan Ibu Maggy T. Suhartono; Tim Manajepten Program Doktor (TMPD) dan Direktorat Jendral Pembinaan Penelitian dan Pengabdian -pada Masyarakat yang telah mendanai melalui Hibah Bersaing III tahun 1998 dan 1999. DAFTAR PUSTAKA Aziz, S. A. dan M. Ghulamahdi. 1994. Pengembangan budidaya bambu betung. Agrotek. ｾｵｮｩＮ＠ 1(2):34-35. ' Aziz, S. A. dan Adiwirman. 1997. Pengaruh jumlah buku,terhadap pertumbuhan setek cabang bambu Betung, Andong, Temen, Ampel Hijau, Amp'el Kuning, Ori, Tali, dan Hitam ｾ｡､＠ Kultur Air. Buletin Agronomi 1(25):1-7. I , Aziz, S. A. 1997. Cara penanaman setek buluh bambu Betung, Andong, Temen, Hitam, dan Tali. Buletin Agronomi 2(25):15-22. I Aziz, S. A.' et M. Ghulaniahdi.1997. Culture des Bambous Importants en Indonesie. Bam ,bou. Association Europeene du Bambou. Numero Special Reunion Europeenne 8, 9, 10 ef 11 Mai 1997. I Banik, R. L. 1980. Propagation of Bamboo by Clonal Methods and by Seeds. In G. Lessard ,and A. Chouinard (eds.), Bamboo Research in Asia. Proc. of Workshop in Singapore, May, 28-30 1980. Singapore. 4\ I Chambers, S. M., J. H. R. Heuch, and A. Pierrie. 1991. Mieropropagation and in vitro flowering _of the bamboo Dendrocalamus hamiltonii Munro. Plant Cell, Tissue and Organ ｃｵｬｾ･Ｎ＠ , 27(1): 45-48. I Dransfield, S. and E. A. Widjaja (Editors). 1995. Plant Resources of South-East Asia no. 7. I Bamboos. Backhuys Publishers, Leiden. 189 p. Farelly, D. 1984. The Book of Bamboo. Sierra Club Books. San Fransisco. 332 p. ,. 364 I Makalah PO,ster i Hasan, S. M. 1980. Lessons From Post Ptudies on the Propagation ofBamboo.iIn G. Lessard and A. Chouinard" (Eels.), Bamboo Research in ｾｳｩ｡Ｎｐｲｯ｣･､ｮｧ＠ of a WorkI shop 28-30 May, • 1981. Smgapore. I Lydia. (tanpa tabun). Perbanyakan Bambu (Dendrocalamus membraneceus) Jtelalui Proliferasi Pucuk Secara In Vitro. I A. F., A. L. Nadgir, S. R. Thengane, C. H. Padhe. S. S. Kuspe, M. V. Shirgurkar, Mascarenhas, " I V. A. Parasharanir, and R. S. Nadgauda. 1988. Potential Application of Tissue Culture for Propagation of Dendrocalamus strictus. . I Mc. Clure, F. A. 1966. The Bamboos-A Fresh Perspective. Harvard Univ. USA!. Prutpongse, D and P. Gavinletvatena. 1992. In Vitro Micropropagation of 54 Species from 15 Genera of Bamboo. Hort. Science. 27(5):453-454. i Ruhiyat, M. 1998. Perbanyakan Bambu Betung (Dendrocalamus asper) Secara In Vitro de ngan Eksplan Mata Tunas Bambu. Tesis. Jurusan Budidaya Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Sass, J. E. 1951. Botanical Microtechnique. Ed. Ke-3. Iowa: The Iowa State Cdllege Press. Saxena, S. 1990. In Vitro Propagation of the Bamboo (Bambusa tulda) Through Shoot Proliferation. Plant Cell Report. 9:431-434. Vongvijitra, R 1988. Traditional Vegetative Propagation and Tissue Culture of some Thai Bamboo. In: Rao I. V. R, R Granahara, C. B. Sharti (Eds.). Proceeding of Int. Bamboo Workshop. India. Woods, S. H., G. C. Phillips, J. E. Woods, and G. B. Collins. 1992. Somatic Etnbryogenesis and Plant Regeneration from Sygotic Embrio Explanys in Mexican Weeping Bamboo Otatea acuminata aztecom. Plant Cell Reports 11 :257-261. Yeh, M. and W. Chang. 1987. Plant Regeneration via Somatic Embryogenesis in Mutual Embryo-Derived Callus Culture of Sinocalamus latiflora (Mumo) Mc. Clure. Plant" Science. 51 (1987) 93-96. Zamora, A. B., S. S. Gruezo, and O. P. Damasco. 1987. Callus Induction and Plant Regeneration from Internode Tissues of Dendrocalamus latiflorus cv machiku, p.76.,.82. In A. N. Rao and A. M. Yusoff (eds.). Proceedings of the Seminar on. fissue Culture of Forest Species, 15-18 June, 1987. Kuala Lumpur. I I Prosiding Seminar Nasional Hasil Penelitian yang Dibiayai oleh Hibah Kompetitif Bogar, 1-2 Agustus 2007 365