K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus ANATOMÍA DE LA LÁMINA FOLIAR DE ESPECIES DE Lasiocephalus WILLD. EX SCHLTDL. (ASTERACEAE) Y SUS IMPLICACIONES TAXONÓMICAS Kelvin Silva-Moure, Pedro Torrecilla y Marlene Lapp Instituto de Botánica Agrícola, Facultad de Agronomía, Universidad Central de Venezuela, Maracay, estado Aragua. ksilvamoure@gmail.com COMPENDIO Lasiocephalus Willd. ex Schltdl. (Asteraceae-Senecioneae), presenta diversidad de sus formas de crecimiento, que va desde trepadoras hasta subarbustos de hojas estrechas y subcoriáceas, las cuales guardan una cercana relación con el tipo de ambiente y el hábitat al que pertenecen. La delimitación subgenérica históricamente ha estado en función del biotipo; sin embargo, actualmente se han propuesto caracteres morfológicos reproductivos y moleculares para deinirla. Se compararon características anatómicas de la lámina foliar entre especies representativas de estos biotipos, para deinir la delimitación infragénerica y así complementar las nuevas propuestas morfológicas. El estudio se realizó tomando en consideración a las especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela, L. cuencanus (Hieron.) Cuatrec., L. doryphyllus (Cuatrec.) Cuatrec., L. longipenicillatus (Sch. Bip. ex Sandwith) Cuatrec., L. otophorus (Wedd.) Cuatrec. (presencia dudosa) y L. patens (Kunth) Cuatrec. El material vegetal se obtuvo de muestras colectada en campo o de fragmentos de material herborizado tomados de exsiccatas, de las cuales se prepararon láminas con secciones transversales y macerados de la parte media de la lámina foliar, posteriormente fueron observadas, analizadas y fotograiadas. Se evidenció el valor taxonómico para la delimitación subgenérica del carácter ubicación de los estomas (hojas aniestomáticas o hipoestomáticas). Entre especies se resaltan los caracteres relacionados a los tricomas (número, tamaño y grosor relativo de sus células, además la forma de la ubicada basalmente), el número de capas de parénquima en empalizada y la relación entre este tejido y el parénquima esponjoso. Se presenta una clave artiicial basada en caracteres anatómicos foliares para la determinación de especies. Recibido: 29/07/14 Aceptado: 23/01/15 155 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 PALABRAS CLAVE Anatomía laminar comparada, Lasiocephalus, Senecioneae, Venezuela. LEAF-BLADE ANATOMY OF SPECIES OF Lasiocephalus WILLD. EX SCHLTDL. (ASTERACEAE) AND TAXONOMIC IMPLICATIONS ABSTRACT Lasiocephalus Willd. ex Schltdl. (Asteraceae-Senecioneae) present an diversity of growth forms, ranging from climbing to subcoriaceous subshrubs of narrow leaves, which all have a close relationship with the type of environment and habitat to which they belong. The subgeneric delimitation has historically been dependent on the biotype, however, currently reproductive morphological and molecular characters are proposed to deine it. Anatomical characteristics of the leaf blade compared between species representative species of these biotypes, to deine the infrageneric delimitation and so complement the new morphological proposals. The study was performed taking into consideration Lasiocephalus species present in Venezuela, L. cuencanus (Hieron.) Cuatrec., L. doryphyllus (Cuatrec.) Cuatrec., L. longipenicillatus (Sch. Bip. ex Sandwith) Cuatrec., L. otophorus (Wedd.) Cuatrec. (doubtful presence) and L. patens (Kunth) Cuatrec. The plant material was obtained from specimens collected in the ield or fragments taken from herbarium exsiccatae, of which slides of cross sections and material macerated from the middle portion of the blade were prepared, subsequently observed, analyzed, and photographed. The taxonomic value for the subgeneric delimitation with the location of the stomata (amphistomatic or hipostomatic leaves) was veriied. Interspecies relation is highlighted by trichome (number, size and relative thickness of the cells, in addition the shape of the basal cell), and the number of layers of palisade parenchyma and its relationship to the spongy parenchyma tissue. An artiicial key for species determination is presented. KEY WORDS Comparative anatomy, Lasiocephalus, Senecioneae, Venezuela. 156 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus INTRODUCIÓN Lasiocephalus Willd. ex Schltdl. está incluida en Asteraceae dentro de la tribu Senecioneae y con una circunscripción mundial de 2 a 3 (sensu Nordenstam 1978) hasta aproximadamente 25 especies (sensu Cuatrecasas 1978), distribuidas a lo largo de la cordillera de los Andes desde Venezuela hasta Bolivia y Perú, con una mayor diversidad en Ecuador, país que posee gran número de representantes endémicos. En Venezuela, Badillo et al. (2008), reconocen cinco especies distribuidas en los estados que incluyen ecosistemas andinos: L. cuencanus (Hieron.) Cuatrec. (Mérida), L. doryphyllus (Cuatrec.) Cuatrec. (Zulia), L. longipenicillatus (Sch. Bip. ex Sandwith) Cuatrec. (Mérida, Táchira y Trujillo), L. otophorus (Wedd.) Cuatrec. (Táchira) y L. patens (Kunth) Cuatrec (Mérida, Trujillo). Sin embargo, investigaciones posteriores mencionan que para el caso de L. otophorus, su distribución en el país es dudosa (Silva-Moure et al. 2013). Lasiocephalus es particularmente interesante por la diversidad de sus formas de crecimiento, que va desde trepadoras hasta subarbustos de hojas estrechas y subcoriáceas, las cuales todas tienen una relativa y cercana relación con el tipo de ambiente y hábitat al que pertenecen (Luteyn 1999, Sklenář et al. 2010, Dušková et al. 2011). En función de lo anterior, Cuatrecasas (1978), propone una clasiicación subgenérica conformada por dos grupos: subgen. Lasiocephalus Cuatrec. que incluye biotipos arbustivos a subarbustivos erectos con capítulos relativamente grandes; subgen. Aetheolaena Cuatrec. que abarca trepadoras y subarbustos escandentes, con capítulos por lo general más pequeños; resaltando los caracteres relacionados al biotipo en la clasiicación. Resultados del trabajo molecular de Dušková et al. (2010), mostraron dos clados coincidentes con las expresiones biotípicas antes señaladas; salvo los casos de L. longipenicillatus (subarbusto erecto), que aparece vinculado al de las especies trepadoras propias de los bosques (como por ejemplo: L. patens (Kunth) Cuatrec.), y la relación cercana entre L. lingulatus Schltdl. (subarbusto erecto de capítulos pequeños) y L. ovatus Schltdl. (subarbusto erecto de capítulos más grandes); estos casos excepcionales pueden ser tomados como evidencia de que los caracteres señalados por Cuatrecasas (1978), no son lo suicientemente consistentes como para brindar una adecuada delimitación subgenérica; aunque hay que tener en cuenta que en el análisis de Dušková et al. (2010) no se incluyó una amplia representación de las especies de este género. Es por lo anterior que Silva-Moure et al. (2013) partiendo del estudio primario de Schlechtendal (1818), el sensu Cuatrecasas (1978) y los resultados obtenidos por Dušková et al. (2010), propusieron para la delimitación del subgen. Lasiocephalus 157 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 Cuatrec. los caracteres: presencia de calículo escamoso y anteras visiblemente exertas, ubicando en este grupo a L. doryphyllus; mientras que para el subgen. Aetheolaena Cuatrec. propusieron: calículo no escamoso y anteras inclusas o al mismo nivel del limbo de la corola, donde se incluyó a. L. cuencanus, L. longipenicillatus, L. othophorus y L. patens. Tomando en consideración el sensu Cuatrecasas (1978), la conformación de los posibles grupos intragenéricos está en estrecha relación con las adaptaciones a ambientes particulares y las expresiones biotípicas que esto conlleva. Al respecto, Gorčicová (2010), presentó un estudio comparativo de la anatomía de la lámina foliar de L. patens y L. sodiroi (Hieron.) Cuatrec., correspondiendo a los hábitats de bosque montano y superpáramo respectivamente; obteniendo diferencias en cuanto el grosor del parénquima, abundancia de tricomas visibles y disposición del tejido vascular, caracteres propios de una hoja del tipo xeromórico en el caso de L. sodiroi, como adaptación a las extremas condiciones del superpáramo y en contraposición de L. patens que presenta una hoja no xeromórica propia de ambientes de bosque montano. Azocar (2006), mencionaron que las características xeromóricas corresponden a mecanismos de tolerancia para reducir el impacto de las bajas temperaturas, evidenciadas en especies de páramo pertenecientes a Asteraceae, Scrophulariaceae y Valerianaceae. Por otra parte, Sklenář et al. (2011), mencionaron que posiblemente, Lasiocephalus muestra una tendencia evolutiva en la adaptación a la falta de agua. Tales autores airman que las especies que habitan los bosques montanos permanentemente húmedos, como L. patens y L. involucratus (Kunth) Cuatrec. tienen un número relativamente mayor de hojas grandes y suaves (no coriáceas), y gracias a una intensa transpiración la amplia red vascular proporciona agua que se irriga por el mesoilo, evaporándose con eicacia previniendo el marchitamiento; sin embargo, la pared de sus células es menos elástica, algo que puede inluir negativamente en su capacidad de almacenar agua y en consecuencia llevar a una pérdida de volumen de las hojas ante una pérdida rápida de presión por turgencia. En contraste, las células de las hojas de las especies de páramo (por ejemplo: L. ovatus y L. lingulatus) que son típicamente pequeñas y coriáceas, poseen paredes celulares elásticas que en plena turgencia pueden contener una mayor cantidad de agua que es liberada para impedir un rápido marchitamiento. Los estudios anatómicos anteriores sobre especies de Lasiocephalus, se orientan en describir las relaciones entre estructura y función ecoisiológica más a estudiar comparativamente las características anatómicas entre los representantes del género que aporten información válida para la delimitación de grupos; con base a lo anterior, se plantea determinar un conjunto de caracteres anatómicos de valor 158 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus taxonómico para una adecuada delimitación subgenérica de Lasiocephalus; así como, elaborar una clave para identiicar las especies presentes en Venezuela y inalmente hacer algunas consideraciones sobre la estructura anatómica y la función en determinados ambientes. MATERIALES Y MÉTODOS Para esta investigación se consideraron el total de cinco especies de Lasiocephalus presentes en el país, según lista suministrada en el Nuevo Catálogo de la Flora Vascular de Venezuela (Badillo et al. 2008). Sin embargo, tal como señalan Silva-Moure et al. (2013), no existen en los herbarios nacionales exsiccata de L. othophorus que muestren especímenes provenientes de colecciones del territorio nacional, por lo cual solo puede presumirse la presencia de esta especie en el país; para remediar esta falta se tomaron muestras de especímenes de esta especie colectadas en Colombia y Ecuador depositados en VEN (Tabla 1). El material vegetal fue colectado en campo y preservando en frascos de vidrio con Formaldehido-Acido Acético-Etanol 70% o usando fragmentos de material herborizado tomados de exsiccata. Fueron utilizadas tres a cuatro hojas a plena exposición solar de al menos tres individuos de cada especie. Este material se lavó con agua corriente y luego se tomaron porciones correspondientes al tercio medio de la lámina. Para el tratamiento del material herborizado, se tomaron trozos de la parte media de la lámina foliar, los cuales fueron hidratados en lactofenol, siguiendo el procedimiento descrito por Peña y Saralegui (1982) o hirviéndolos en una solución de agua:glicerina (1:1) por períodos variables de tiempo, dependiendo del grosor de la hoja. Posteriormente el material se trató de igual forma que lo descrito para el material ijado. Al estudiar la lámina foliar, se efectuaron observaciones tanto en vista frontal, como en secciones transversales. Para la obtención de estas últimas fueron utilizados trozos de material previamente hidratado o ijado, proveniente del tercio medio de la hoja, donde se seleccionó una porción de aproximadamente un centímetro cuadrado, que incluyó la nervadura media; tales porciones fueron seccionados transversalmente a mano alzada, teñidas con azul de toluidina acuosa (1%), montadas en agua:glicerina (1:1) y inalmente selladas con esmalte para uñas, preparando así láminas semipermanentes. El estudio frontal de las epidermis se efectuó luego de obtener éstas con macerados, para ello se colocaron segmentos de hoja en una mezcla 1:1 (V:V) de hipoclorito de sodio comercial y agua a temperatura ambiente en función del material a utilizar 159 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 por 5-10 min; al cabo de este tiempo las muestras se colocaron en agua durante dos días; al inalizar este período se separaron las epidermis con ayuda de un pincel; éstas fueron teñidas y montadas en forma semejante a lo expuesto para la preparación en el estudio de las secciones transversales. Ambas metodologías fueron realizadas en base a lo expuesto por Lapp et al. (2004) y Lapp et al. (2013). Las láminas semipermanentes para la preperación se estudiaron bajo el microscopio óptico Nikon E200 y adicionalmente, con la ayuda de un ocular micrometrado incorporado al microscopio, se realizaron las siguientes mediciones: grosor de la epidermis adaxial y abaxial más la cutícula (μm); longitud de estomas (μm) y densidad de estomas (estomas/mm2); grosor del parénquima en empalizada (μm) y del parénquima esponjoso (μm) de la hoja; con estos últimos valores se calculó la relación parénquima en empalizada/parénquima esponjoso (P.emp/P.esp). Se efectuó un mínimo de 30 medidas en distintas preparaciones escogidas al azar, para calcular posteriormente los valores promedio y la desviación estándar. Tomando en consideración los resultados obtenidos en la caracterización anatómica y en la deinición de caracteres diagnósticos, se elaboró una clave artiicial con base en éstos. Tabla I. Especies y especímenes de Lasiocephalus analizados, localidades de colección, colectores y herbarios donde están depositadas las muestras. Taxón Localidad Altura Colector y herbario L. cuencanus Edo. Mérida, Dtto. Rangel, cuenca de la quebrada de Las Cañas. 3.6002.950 msnm L.Ruiz-Terán, J. Luteyn y M. Lebrón 15124 (MERF). L. doryphyllus Edo. Zulia a 1km de la hacienda Buena Vista al norte del cerro Laminado a 5km al norte de Buena Vista, Sierra de Perijá, Dtto. de Périja. 3.5003550 msnm S.Tillett y K. Höning, s. n. (MY). L. longipenicillatus Edo. Mérida, vía Piñango, bajando del pico de El Águila, antes de las antenas. Edo. Mérida, llano redondo a orillas de la quebrada Mistafí, aluente más largo de los que forman el río Chama, al norte de San Rafael de Mucuchíes, Dtto. Rangel. 3.820 msnm M. Lapp, P. Torrecilla, K. Silva-Moure y T. Ruiz 590 (MY). Ruiz-Terán 257 (MER) 160 3.850 msnm K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus Tabla I. Continuación. Taxón L. otophorus L. patens Localidad Altura Colector y herbario COLOMBIA: Dpto. Cundinamarca, 3.250municipio de La Calera, Páramo 3.500 msnm de Palacio. ECUADOR: Prov. Azuay, The 8,000Eastern Cordillera, 1-8 km, north 9,000 ft of the village of Sevilla de Oro. Díaz-Piedrahita 300 (VEN) Dtto. Miranda, La Lagunita entre Las Palmas y Las González, páramo de Palmira. Cuenca del río Aracay, aluente del Santo Domingo, arriba de Las Piedras. 2.8003.200 msnm L.Ruiz-Terán y J. Duarte 12433 (MY) 2.7002.550 msnm L.Ruiz-Terán; M. López-Figueira y S. López-Palacios. 8269 (MY) W. Camp. E-4713 (VEN) RESULTADOS Y DISCUSIÓN EPIDERMIS Vista frontal En ambas epidermis y en todas las especies estudiadas, las células presentan formas desde ligeramente redondeadas hasta alargadas (Figs. 1 y 2); de igual manera, se observó una capa de cutícula, la cual recubre y es relativamente más conspicua en L. doryphyllus (Figs. 1B y 2B) y L. otophorus (Figs. 1D y 2D). En la Tabla II se muestran las características cualitativas derivadas del estudio de la epidermis en vista frontal, las cuales contribuyen a la caracterización general de los taxa bajo estudio, aunque no son lo suicientemente deinidas y contrapuestas como para ser consideradas de valor taxonómico. Sección transversal Ambas epidermis son uniestratas; en el caso de la adaxial se presentan células rectangulares, excepto en L. longipenicillatus que las posee desde cuadradas hasta rectangulares y en la abaxial, éstas se presentan rectangulares en todas las especies. Las características cuantitativas registradas en sección transversal de ambas epidermis se encuentran resumidas en la Tabla III. 161 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 Estomas Con respecto al tipo de hoja según la ubicación de los estomas, se observó que en L. doryphyllus (Figs. 1B y 2B) es aniestomática, mientras que en el resto de las especies es hipoestomática, tal carácter ha sido señalado de valor taxonómico para otros géneros en Asteraceae, como Stevia Cav. y Oyedaea DC. donde ha permitido separar grupos intragénericos (Lapp et al. 2004, Arias 2005). Es por lo anterior que es posible delimitar a L. doryphyllus del resto. Los estomas, en todos los casos, son anomocíticos, lo cual no es considerado de valor diagnóstico, ya que éste es un carácter muy común en Asteraceae (Metcalfe y Chalk 1950). Los estomas adaxiales de L. doryphyllus miden entre 35-40 μm de longitud y se presentan 2 estomas/mm2, mientras que en la abaxial, todas las especies presentan 38-45 μm de longitud y la densidad para L. doryphyllus es de 54-86 estomas/mm2, L. longipenicillatus y L. patens alcanza 80-116 estomas/mm2, L. otophorus es de 72-102 estomas/mm2 y en L. cuencanus está entre 104-135 estomas/mm2. En sección transversal, la posición de los estomas (Fig. 3) con relación al nivel de las células típicas de la epidermis es variable; en L. longipenicillatus (Fig. 3B) se encuentran elevados, mientras que en el resto de las especies estudiadas se presentan al mismo nivel de las células típicas. En todas las especies los estomas presentaron cuernos cuticulares similares. Tricomas Todas las especies presentaron tricomas tectores, los cuales se caracterizan por ser pluricelulares con variaciones en el número, tamaño y grosor relativo de sus células, además de la forma de la ubicada basalmente (Tabla IV y Fig. 4). Para L. otophorus resalta la presencia de un tipo particular conformado por dos células basales de igual longitud y relativamente pequeñas respecto a una apical extremadamente larga (Fig. 4D), tal estructura ha sido descrita y señalada por Jeffrey (1987), en una lista de descriptores propuesta para Senecioneae, denominándole tricoma apendicular. Los caracteres epidérmicos antes expuestos pueden ser considerados de valor taxonómico para diferenciar a las especies de Lasiocephalus, debido a que son contrastantes, de fácil reconocimiento y constantes en los especímenes estudiados, además han sido usados para delimitar grupos de especies en otros géneros de Asteraceae, tales como Stevia Cav. (Eupatorieae), Pentacalia Cass. y Emilia Cass. (Arias 2005, Adedeji y Jewoola 2008, Lapp et al. 2013). 162 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus MESOFILO La hoja es de tipo bifacial en todas las especies bajo estudio (Fig. 5). Hacia la cara adaxial se localiza el parénquima cloroiliano en empalizada (P. emp) y en la abaxial el esponjoso (P. esp). Los resultados referidos al número de capas y grosor de cada tipo de tejido parenquimático, así como la relación P. emp/P. esp, se exponen en la Tabla V. L. longipenicillatus (Fig. 5C), presenta un mesoilo compacto donde la capa superior de parénquima en empalizada es más regular que las inferiores, en el resto de las especies este tejido es menos compacto, mostrando espacios intercelulares más amplios y capas menos regulares; en cuanto al parénquima esponjoso, L. longipenicillatus muestra células tabulares y paralelas a la epidermis abaxial, en L. patens (Fig. 5E), L. doryphllus (Fig. 5B) y L. cuencanus (Fig. 5A) existen amplios espacios intercelulares, para el primer y último caso las células son rendondeadas y en el segundo son rectangulares, y en L. otophorus (Fig. 5D) son compactas y redondeadas. El sistema vascular está representado por haces vasculares colaterales cerrados, rodeados por una capa de células parenquimáticas de paredes delgadas y en todos los casos están asociados a cavidades secretoras; tales caracteres son considerado por Metcalfe y Chalk (1950), como comunes en Asteraceae. NERVADURA CENTRAL El contorno de la nervadura central es cóncavo hacia la cara adaxial en L. cuencanus (Fig. 6A), L. doryphyllus (Fig. 6B) y L. patens (Fig. 6E), plano y estrecho en L. longipenicillatus (Fig. 6C) y plano y amplio en L. otophorus (Fig. 6D), siendo prominente en todos los casos. En la caracterización anatómica, todas las especies presentan epidermis uniestrata en ambas caras, provista de células redondeadas con paredes relativamente engrosadas, acompañadas por una densa capa de ceras epicuticulares que las cubre, salvo en L. otophorus. En general, se observó de una a dos capas de colénquima subepidérmico, excepto en L. otophorus que no presenta este tejido. Todos los taxas estudiados, muestran tejido parenquimático de células grandes y paredes delgadas; conteniendo drusas en el caso de L. otophorus. El tejido vascular está conformado por tres hasta cinco haces vasculares colaterales cerrados distribuidos en forma de arco, uno principal y el resto secundarios, cada uno con un casquete de ibras loemáticas; en el caso de L. patens asociado al haz principal, se detectó un haz más pequeño que los otros haces secundarios, y en L. doryphyllus fueron vistos de cuatro a cinco cavidades secretoras rodeando a los haces vasculares. 163 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 Fig. 1. Vistas frontal de las epidermis adaxiales de especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. A. L. cuencanus. B. L. doryphyllus. C. L. longipenicillatus. D. L. othophorus. E. L. patens. 164 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus Fig. 2. Vistas frontales de las epidermis abaxiales de especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. A. L. cuencanus. B. L. doryphyllus. C. L. longipenicillatus. 165 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 Tabla II. Características cualitativas de las epidermis adaxial y abaxial en vista frontal, de las especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. L. cuencanus Pared celular adaxial Gruesas Paredes anticlinales adaxiales Rectas Pared celular abaxial Gruesas L. doryphyllus L. longipenicillatus Gruesas Delgadas Gruesas Delgadas L. otophorus Gruesas L. patens Delgadas Rectas Ligeramente sinuosas Ligeramente sinuosas Ligeramente sinuosas Especie Delgadas Paredes anticlinales abaxiales Ligeramente sinuosas Muy sinuosas Ligeramente sinuosas Muy sinuosas Delgadas Muy sinuosas Tabla III. Grosor de las epidermis foliares en especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. Especie L. cuencanus L. doryphyllus L. longipenicillatus L. otophorus L. patens E. adax + cut. (μm) E. abax + cut. (μm) 7±1,5 6,8±1,5 24,3±4,2 17,3±5 37±7 26±3 15,4±5 18±4 19,3±3,3 14±2,3 E. adax + cut.: grosor de la epidermis adaxial más cutícula; E. abax + cut.: grosor de la epidermis abaxial más cutícula. 166 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus Fig. 3. Secciones transversales de las láminas foliares, mostrando ubicación de estomas en especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. A. L. cuencanus. B. L. longipenicillatus. D. L. othophorus. E. L. patens. 167 Especie N° células Forma célula basal Tamaño relativo de las células del tricoma Grosor relativo del tricoma L. cuencanus Más de 3 Engrosada y cónica Cada una es progresivamente más larga que la anterior Gruesos L. doryphyllus Más de 3 Cilíndrica Cada una es progresivamente más larga que la anterior Gruesos L. longipenicillatus Más de 3 Cilíndrica Cada una es progresivamente más larga que la anterior Delgados 3 Cilíndrica Tercera célula más larga que las anteriores Delgados Más de 3 Cilíndrica Tercera célula de la misma longitud que la anterior Gruesos L. otophorus L. patens ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 168 Tabla IV. Caracteres cualitativos relacionados a los tricomas foliares de las especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus Fig. 4. Tricomas característicos de especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela A. L. cuencanus. B. L. doryphyllus. C. L. longipenicillatus. D. L. othophorus. E. L. patens. 169 N° capas de Grosor N° capas de Grosor P. emp P. emp (μm) P. esp P. esp (μm) L. cuencanus 1 30,5±4 4 65±9 0,46 (<1) L. doryphyllus 2 140±21 3-4 123±32 1,14 (>1) 2-3 133±17,6 4 99±16 1,34 (>1) L. otophorus 1 30,5±4 4 128±13,6 0,53 (<1) L. patens 1 63±10 3-4 92±11 0,67 (<1) Especie L. longipenicillatus P. emp/P. esp P. emp: parénquima en empalizada; P. esp: parénquima esponjoso; P. emp/P. esp: Relación entre el parénquima en empalizada y el parénquima esponjoso. ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 170 Tabla V. Caracteres cuantitativos relacionados al mesoilo foliar de las especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus Fig. 5. Cortes transversales de la lámina foliar de especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela. A. L. cuencanus. B. L. doryphyllus. C. L. longipenicillatus. D. L. othophorus. E. L. patens. 171 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 Fig. 6. Cortes transversales de la nervadura media de la lámina foliar de especies de Lasiocephalus presentes en Venezuela A. L. cuencanus. B. L. doryphyllus. C. L. longipenicillatus. D. L. othophorus. E. L. patens. 172 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus ALGUNAS CONSIDERACIONES ECOFISIOLÓGICAS DE LA ESTRUCTURA ANATÓMICA FOLIAR L. longipenicillatus y L. doryphyllus, presentan tricomas pluricelulares en ambas epidermis, los mismos han sido descritos macromorfológicamente por SilvaMoure et al. (2013), conformando un indumento aracnoideo, adicionalmente dichas especies muestran hacia su cara adaxial una cutícula gruesa; todas estas características según Ely y Torres (2003), participan en el control de la temperatura y radiación incidente sobre la lámina al relejar parte de la misma y favorecer el establecimiento de una capa de aire estático en la supericie que actúa como control térmico al reducir el enfriamiento por convección. Además, tales tricomas podrían cumplir una función en la compensación del CO2, en plantas presentes en altitudes elevadas, donde la concentración atmosférica de este gas es relativamente baja, jugando un papel importante al impedir la difusión de esta molécula al exterior, siendo reabsorbido nuevamente por los estomas. Azócar (2006), señala que esta adaptación se corresponde con el hábitat de páramo en el que medran estas especies; caracterizado por la alta radiación solar, relativa baja disponibilidad de agua (promedio de 798 mm), bajas temperaturas (promedio 2,8°C) y vientos secos y fríos. Por otra parte, tal como lo observó Luque et al. (1999), el mesoilo compacto, como el que se presenta en L. longipenicillatus y L. doryphyllus, con un parénquima de empalizada con pocos espacios intercelulares, evita que se acumule agua entre las células, por lo que incrementa la resistencia a la congelación. Coincidiendo con Gorčicová (2010), se obtuvieron diferencias anatómicas entre las especies de páramo (L. doryhyllus y L. longipenicillatus) y las de bosque propiamente dicho o transicional (L. cuencanus, L. patens y L. othophorus), donde las primeras se caracterizaron por tener características xeromóricas, tales como: una mayor proporción de parénquima en empalizada respecto al parénquima esponjoso (P. emp/P. esp >1) y mayor densidad de tricomas visibles. García et al. (2005), brindan una explicación a esto al demostrar que el valor del grosor de la hoja aumenta junto con el gradiente altitudinal, como una adaptación a los niveles altos de insolación, siendo tal carácter producto de la plasticidad estructural, más que ser evidencia para mostrar relaciones ilogenéticas. Al respecto Dušková et al. (2010), conirmaron bajo un análisis molecular la relación estrecha entre L. longipenicillatus y L. patens, especies de anatomía foliar contrastante. 173 ERNSTIA Vol 24 (2) 2014: 155-177 CONSIDERACIÓN TAXONÓMICA SOBRE Lasiocephalus WILLD. EX SCHLTDL. Tomando en cuenta los nuevos caracteres morfológicos para la delimitación de los subgéneros en Lasiocephalus presentados por Silva-Moure et al. (2013), en conjunto al valor taxonómico de la ubicación de los estomas, se adiciona la presencia de hojas aniestomáticas a la deinición del subgen. Lasiocephalus e hipoestomáticas para el subgen. Aetheolaena. A pesar de que existen diferencias en los valores de las medias que describen las características cuantitativas para las especies los rangos que toman los mismos valores suelen solaparse entre si, por lo tanto no son recomendables para la determinación especíica en las mismas en una clave artiicial. En relación a estos caracteres García et al. (2005), mencionan que los valores que se obtienen son producto de la plasticidad estructural, variando en determinadas condiciones ambientales. Sin embargo, es posible incluir tales características cuantitativas en la clave artiicial cuando éstas toman valores discretos, tales como el número de capas de parénquima en empalizada y el rango que toma la relación P.emp/P.esp que ser mayor o menor a uno. Al nivel interespecíico resaltan por su valor taxonómico y consistencia los caracteres propios de los tricomas y el nivel de los estomas, los cuales son usados para delimitar las especies. El tricoma apendicular es carcterístico de L. otophorus dentro del subgen. Lasiocephalus y en el caso de L. cuencanus, la forma de la célula basal permite diferenciarlo de L. longipenicillatus y L. patens, y ambas se diferencian entre sí de forma consistente, gracias a la ubicación de los estomas en relación a las células epidérmicas típicas y al número de capas de parénquima cloroiliano y rango de la relación P.emp/P.esp. CLAVE ARTIFICIAL ANATÓMICA PARA LAS ESPECIES DE Lasiocephalus WILLD. EX SCHLTDL. PRESENTES EN VENEZUELA 1a. Hoja aniestomática. ……………… L. doryphyllus (Subgen. Lasiocephalus) 1b. Hoja hipoestomática. …………....………..…… 2 (Subgen. Aetheolaena) 2a. Tricomas con tres células, siendo la apical extremadamente larga respecto a la subapical (apendicular) ................................................... L. otophorus 2b. Tricomas con más de tres células, siendo la apical de longitud semejante respecto a la subapical (no apendicular) .….…….…...................……..... 3 3a. Célula basal de los tricomas ancha y cónica. ……….………… L. cuencanus 174 K. Silva-Moure, P. Torrecilla y M. Lapp Anatomía de la lámina foliar de Lasiocephalus 3b. Célula basal de los tricomas estrecha y cilíndrica. ……...........……........ 4 4a. Estomas a nivel de las células epidérmicas típicas, una capa de células de parénquima en empalizada de la lámina y la relación P.emp/P.esp<1. …… ………………………………..…............................................... L. patens 4b. Estomas sobre el nivel de las células epidérmicas típicas, dos a tres capas de células de parénquima en empalizada de la lámina y la relación P.emp/ P.esp>1. …………………........................................... L. longipenicillatus CONCLUSIONES El carácter tipo de hoja según la ubicación de los estomas es usado para la delimitación de los subgéneros de Lasiocephalus; el estado de éste carácter es deinido para el subgen. Lasiocephalus como aniestomática y para el subgen. Aetheolaena como hipoestomática, estos caracteres anatómicos complementan los rasgos morfológicos reproductivos y moleculares previamente propuestos. Es reconocido el valor taxonómico de los caracteres asociados a los tricomas y al grosor del mesoilo (número de capas de parénquima en empalizada y la relación P.emp/P.esp) para la delimitación de las especies. AGRADECIMIENTOS Al Fondo Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación (FONACIT) de la República Bolivariana de Venezuela por el inanciamiento del presente trabajo, mediante el proyecto PEII N° 201100224. También a D. Jáuregui y a N. Garcés por su asesoramiento en microtecnia vegetal. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Arias, J. 2005. Revisión taxonómica del género Stevia Cav. (AsteraceaeEupatorieae) en Venezuela. Trabajo de grado de Magíster Scientiarum en Botánica Agrícola. Facultad de Agronomía, Universidad Central de Venezuela. Maracay. 240 p. Azocar, C. 2006. 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