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  • T-Espe-Iasa I-004554-P

    Cargado por

    Rossy Ordoñez
    7 vistas42 páginas
    Este documento describe un estudio sobre el establecimiento de protocolos de regeneración in vitro de Pumamaqui (Oreopanax ecuadorensis) mediante cultivo de tejidos. El estudio evaluó diferentes tratamientos de desinfección, medios de cultivo y citocininas para determinar los más efectivos para la multiplicación de explantes. Los resultados mostraron que el protocolo de desinfección con jabón, yodo y Benlate fue el más efectivo, y que el medio de cultivo Quorin Lepoivre y la citocinina BAP a 0.

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    Este documento describe un estudio sobre el establecimiento de protocolos de regeneración in vitro de Pumamaqui (Oreopanax ecuadorensis) mediante cultivo de tejidos. El estudio evaluó diferentes tratamientos de desinfección, medios de cultivo y citocininas para determinar los más efectivos para la multiplicación de explantes. Los resultados mostraron que el protocolo de desinfección con jabón, yodo y Benlate fue el más efectivo, y que el medio de cultivo Quorin Lepoivre y la citocinina BAP a 0.

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    “ESTABLECIMIENTO DE PROTOCOLOS DE REGENERACIÓN In Vitro DE

    PUMAMAQUI Oreopanax ecuadorensis MEDIANTE CULTIVO DE TEJIDOS ”

    LUIS YANEZ
    INTRODUCCIÓN
    • Peligro de extinción
    • Olivo,
    Pumamaqui

    • Arrayan
    presión

    • Pastos y cultivos
    • Biodiversidad afectada
    • Propagación sexual : semillas

    • Propagación asexual: estacas


    • Tratamiento de desinfección más adecuado de
    Oreopanax ecuadorensis,

    • Medio de cultivo más eficiente para la


    introducción

    • Dosis de citocininas
    ORIGEN DE LA PLANTA

    • La familia Araliaceae
    • 2000 y 2600 msnm
    • Zona Andina
    • 80 sub especies-30 Ecuador
    PUMAMAQUI

    • 12 metros de altura
    • 25 – 30 cm DAP
    • Hojas palmeadas
    • Flores amarillas
    Cultivos In Vitro
    • Totipotencia celular
    • Caracteriticas deseables
    • Plantas deseables
    • Producción continua
    Etapas de la propagación In Vitro

    ETAPA 1
    • Selección de plantas

    ETAPA 2:
    • Selección de material. (limpieza).

    ETAPA 3:
    • Medio de cultivo y Multiplicación.
    MEDIOS DE CULTIVO
    Medios de Cultivo:
    • Murashigue Skoog
    • Cohen y Cooper y Quorin Lepoivre
    • Quorin Lepoivre
    Adición de minerales y vitaminas
    • Citocininas
    • Auxinas
    Producción
    • Multiplicación
    • Enraizamiento
    BENZIL ADENINA KINETINA (KIN)
    ANIMOPURINA SULFATO
    (BAP) (ZEA) • División celular
    • Mayor efecto • Crecimiento de
    • División celular estructuras.
    Reguladores de Crecimiento
    OBJETIVO ESPECIFICO

    • Tratamiento de desinfección más efectivo

    • Medio de cultivo In Vitro más adecuado


     
    • Citocininas (BAP Benzil amino purina, KIN Kinetina
    y AS Adenina Sulfato) con dosis de 0, 0.75 y 1.50
    mg/l.
     
    • Tratamiento más económico en la fase de
    multiplicación.
    HIPOTESIS

    • Las citocininas añadidas en la fase de multiplicación


    con dosis de 0.75 mg/l presentará mayor número y
    elongación de yemas.
    MATERIALE
    S
    pH metro
    Autoclave
    Cámara de flujo laminar
    Porta tubos.
    Pinzas
    Hoja de bisturí
    Plantas de pumamaqui.
    • Citocininas
    • Agua Destilada Esteril.
    • Benomil
    • Jabón bactericida
    • Cloro comercial
    • Cepillo dental
    • Acido peracético
    • Acido acético.
    METODOS
    Desinfección 4 protocolos
    FASE I

    Introducción QL
    Medios de CC
    Fase 2 cultivo MS

    BAP
    Multiplicación ZEA
    Fase 3
    citocininas KIN
    ANALISIS ECONÓMICO

    • Beneficio costo (número de explantes multiplicados).

    • Costos Real (dividiendo el beneficio para sus costos variables)


    dar valor para cada explantes obtenido.
    Unidad experimental:

    • Frascos de vidrio de 100 ml.


    • Medio de cultivo de 10 ml.
    RESULTADO
    S
    DESINFECCIÓ
    N
    Contaminación a los 8 , 30, 60 días de introducción.

    P4: Protocolo de desinfección más efectivo .


    Contaminación de explantes
    8 días 30 dias 60 días

    Sin contaminación :
    8 días 30 días 60 días
    MEDIO DE
    CULTIVO
    Longitud de crecimiento en (cm) a 30 y 45 días de introducción.
     

    M1: Quorin Lepoivre


    M2: Cohen Cooper
    M3: Murashigue Skoog
    Número de brotes a los 30 y 45 días de introducción .
     

    M1: Quorin Lepoivre


    M2: Cohen Cooper
    M3: Murashigue Skoog
    Número de hojas a 30 y 45 días de introducción

    M1: Quorin Lepoivre


    M2: Cohen Cooper
    M3: Murashigue Skoog

    .
     

    M1: Medio de cultivo Quorin Lepoivre más adecuado. .


    Crecimiento de yemas

    Medios de Cultivo
    • Murashigue Skoog

    • Cohen Cooper

    • Quorin Lepoivre
    CITOCININA
    S
    Grado de influencia de tres citocininas en
    número de brotes.

    CITOCININA NÚMERO DE BROTES LONG PLANTAS


    30 DÍAS 45 DÍAS (45 DIAS) VIABLES
    (90 DIAS)

    BAP 1.00±0.24 a 0.89±0.26 a 0.64±0.08 a 0.33±0.17 a


    KIN 0.78±0.22 a 0.78±0.22 a 0.61±0.10 a 0.22±0.15 a
    AS 0.56±0.29 a 0.56±0.29 a 0.50±0.05 a 0.22±0.15 a
    p 0.3571 0.5096 0.2712 0.8478
    Efecto de Citocininas en explantes de
    pumamaqui

    ZEA KIN BAP

    Citocinina BAP mayor efecto en explantes.


    Dosificación de citocininas en explantes

    DOSIS NÚMERO DE BROTES LONG. PLANTAS


    30 DÍAS 45 DÍAS (45 DÍAS) VIABLES
    (90 DÍAS)

    0 0.22±0.15 a 0.11±0.11 a 0.39±0.04 a 0.00±0.00 a


    0.75 1.33±0.24 b 1.33±0.24 a 0.69±0.08 a 0.33±0.17 a
    1.5 0.78±0.22 b 0.78±0.22 b 0.68±0.07 b 0.44±0.18 a
    p 0.0062 0.0019 0.0053 0.1435
    Dosificación

    • 0mg/l 0.75mg/l 1.5mg/l

    Dosificación 0.75 mg/l mayor efecto.


    Influencia de tres citocininas vs. tres dosis.
    CITOCININA DOSIS NÚMERO DE BROTES
    30 DÍAS 45 DÍAS
    BAP 0 0.33±0.33 a 0.00±0.00 a
    BAP 0.75 1.67±0.33 a 1.67±0.33 a
    BAP 1.5 1.00±0.00 a 1.00±0.00 a
    KIN 0 0.33±0.33 a 0.33±0.33 a
    KIN 0.75 1.00±0.00 a 1.00±0.00 a
    KIN 1.5 1.00±0.58 a 1.00±0.58 a
    AS 0 0.00±0.00 a 0.00±0.00 a
    AS 0.75 1.33±0.67 a 1.33±0.67 a
    AS 1.5 0.33±0.33 a 0.33±0.33 a
    p 0.7046 0.5121
    Citocininas vs Dosis.
    CITOCININA DOSIS LONGITUD PLANTAS
    (45 DÍAS) VIABLES
    (90 DÍAS)
    BAP 0 0.43±0.03 a 0.00±0.00 a
    BAP 0.75 0.77±0.15 a 0.33±0.33 a
    BAP 1.5 0.73±0.15 a 0.67±0.33 a
    KIN 0 0.30±0.06 a 0.00±0.00 a
    KIN 0.75 0.80±0.12 a 0.33±0.33 a
    KIN 1.5 0.73±0.15 a 0.33±0.33 a
    AS 0 0.43±0.09 a 0.00±0.00 a
    AS 0.75 0.50±0.12 a 0.33±0.33 a
    AS 1.5 0.57±0.09 a 0.33±0.33 a
    p 0.4210 0.9526
    • BAP 0.75 mg/l KIN O.75 mg/l ZEA
    0.75mg/l

    BAP 0.75 mg/l, más apropiada para multiplicación. .


    Análisis Económico
    Tratamiento Beneficio Costo
    (Citocinina) neto variable
    T1 0 0
    T2 1,35 0,65
    T3 -0,3 1,3
    T4 0 0
    T5 -0,87 0,87
    T6 -0,74 1,74
    T7 0 0
    T8 0,35 0,65
    T9 -0,3 1,3
    Tratamiento 2 ; Dosificación BAP 0.75 mg/l más productivo. .
    Conclusiones
    • El protocolo de desinfección (jabón líquido + yodo + Benlate
    1g/l + hipoclorito de sodio 20% + enjuagues de agua
    destilada), más efectivo.

    • El medio LQ Quoirin y Lepoivre, fue el más adecuado para la


    introducción de las plántulas de pumamaqui.

    • En la fase de multiplicación es recomendable el uso de


    citocinina BAP a dosis de 0.75mg/l, se obtuvo ( 2 yemas
    /brote).
    Recomendaciones

    • Se recomienda para la desinfección de las yemas de


    pumamaqui, colocarlas en una solución de 300 ml de agua
    corriente con 0.3 gramos de Benlate (Benomil), 70 ml de
    jabón líquido bactericida y 30 ml de yodo desinfectante por 15
    minutos,

    • Se las coloca en otra solución compuesta por Hipoclorito de


    sodio al 5% con agua destilada estéril en proporción 1:3, y
    agita constantemente por 5 minutos, para realizar enjuagues
    con agua destilada estéril por tres tiempos, se realizar el corte
    del tejido en agua y se deja secar en papel toalla estéril.
    • El uso del medio de cultivo LQ (Quoirin y Lepoivre,) más
    BAP 0.75 mg/L para mejores resultados en la producción In
    Vitro de pumamaqui.
    GRACIAS.

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